2024年5月20日大连医科大学肿瘤干细胞商榷院刘强和崔柏团队在海外闻名期刊Cell Metabolism（ IF: 27.7）上发表了题为《Oncogenic fatty acid oxidation senses circadian disruption in sleep-deficiency-enhanced tumorigenesis》的遑急商榷后果。商榷发现脂肪酸氧化（FAO，fatty acid oxidation）可看成日夜节拍“感应器”，感知节拍杂乱并传递致癌代谢信号，擢升寝息不及（SD【CXAZ-046】「ハズレなし」ガチでレズ好きなお姉さんたちがオマ○コを舐め合ってイキまくる！26人のレズビアン 2 4時間，sleep deficiency）东谈主群的肺肿瘤发生率。
HENHENLU著述所用汉恒产物如下：
日夜节拍杂乱是当代生活样子的一个显耀特质。寝息不及会打乱日夜节拍，导致免疫功能阻止、代谢杂乱、致使过早损失等。已有商榷标明寝息不及会刺激癌症蜕变、肿瘤孕育和癌症免疫逃遁。哺乳动物的吐旧容新也具有日夜节拍性，在癌症发展历程中，日夜节拍杂乱改变了好多代谢历程，包括葡萄糖、谷氨酸、胆汁酸和脂质代谢。但是，代谢重组感知节拍杂乱若何影响SD促进的癌症发展仍不明晰。
在本商榷中发现：SD扯后腿CLOCK节拍悠扬，从而超激活ACSL1，加快FAO以增强肿瘤干性和孕育；反过来，ACSL1合成的PA-CoA教学ZDHHC5介导的CLOCK Cys194位点的棕榈酰化，不错扼制泛素-卵白酶体降解而巩固CLOCK卵白。进一步发现归附β-内啡肽节拍不错归附CLOCK和ACSL1的节拍，从而逆转SD促进的FAO杂乱和肿瘤干性。总之，作家的商榷猖狂标明，FAO看成日夜节拍“感应器”将SD与肺肿瘤发生计划起来，并建议了β-内啡肽本事疗法政策为SD关系癌症患者提供了一种潜在调理要津。
底下，咱们沿途来了解具体的商榷本体吧：
商榷后果
1.FAO感知SD条目下的日夜节拍杂乱
为了商榷SD对肺生理节拍的影响，作家对野生型C57BL/6J小鼠进行SD措置4周（图1A），与对照组比较，SD小鼠寝息模式显耀不同，表示为醒觉本事延迟，而在非快速眼动（NREM）和快速眼动（REM）寝息中的本事变短（图1B），解释得手开采了SD小鼠模子。之后对其肺组织进行转录组和代谢组关系分析，RNA-seq数据分析发现3284个基因在SD小鼠中失去了日夜节拍，GO分析发现这些基因主要富集于脂质代谢关系生物历程，尤其是FAO（图1C和D）。为了进一步商榷SD措置对FAO节拍的影响，作家进行了UHPLC-MS分析，发现SD小鼠肺中节拍性脂质代谢物数目显耀减少，与对照组比较，有47种节拍性杂乱的脂质代谢物，其中游离脂肪酸FFAs占比最高（图1E-G）。峰值位相散布分析泄漏在对照组和SD小鼠中代谢物的震撼模式也不相通（图1H和I）。以上数据标明FAO在基因抒发水良善代谢功能上感知生理景况下SD教学的节拍杂乱（图1J）。
图1. SD条目下，FAO感知日夜节拍杂乱
2.FAO节拍杂乱看护SD教学的肺癌干性
日夜节拍杂乱不错促进肺癌发展，但其潜在机制仍不明晰。因此，作家进一步商榷SD教学的FAO节拍杂乱是否在肺癌发展中存在作用。最初作家行使汉恒生物提供的AAV-GFP-Cre病毒对KRAS小鼠进行气管内打针抒发Cre，教学小鼠酿成肺肿瘤。病毒打针2天后进行SD造模，并分离在打针后第2/3/5/7周进行CT成像，CT成像泄漏SD措置加快了肺肿瘤的发生发展（图2A）。且在第7周进行的HE、IHC和抒发分析泄漏（图2B和C），SD措置促进了Ki-67及干性秀气物MYC、SOX2、CD166和NANOG基因的抒发。为了进一步考据SD对东谈主源性肺癌的促进作用，作家在NOD/SCID小鼠构建了病东谈主起首的异种移植PDX模子，雷同的，SD措置增多了PDX肿瘤体积（图2D和2E），缩小了荷瘤小鼠的存活率（图2F），并擢升了肿瘤组织中干性标志物的抒发（图2G）。为了细则SD措置促进肿瘤发生的机制，作家对KRAS小鼠肺肿瘤样本进行了RNA-seq分析。与对照组比较，SD组有827个基因显耀上调，GO分析泄漏，这些上调的基因大部分属于脂肪酸代谢历程，十分是FAO（图2H），与图1D猖狂一致。肺肿瘤的脂质代谢组学分析泄漏，SD措置后FA-carnitines增多，FFAs减少（图2I）。此外，FAO的终产物乙酰辅酶A和ATP在KRAS小鼠肺肿瘤中增多，且在SD措置的LLC1同源移植肿瘤中表示出节拍杂乱（图2J和K）。以上数据标明在多种肺癌模子中FAO感知SD教学的基因抒发和代谢物的节拍杂乱。为了说明FAO介导SD教学的肿瘤发生和癌变，作家赐与KRAS 小鼠FAO扼制剂乙莫克舍（ETO）措置。ETO逆转SD所教学的肿瘤（图2L）及Ki-67和CD166的高抒发（图2M）。此外，对LLC1同源移植肿瘤起首的原代细胞的极限稀释分析（ELDA）和成球施行标明，ETO措置扼制了SD教学的成球才调（图2N）。要而论之【CXAZ-046】「ハズレなし」ガチでレズ好きなお姉さんたちがオマ○コを舐め合ってイキまくる！26人のレズビアン 2 4時間，这些数据标明FAO感知日夜节拍杂乱是SD促进肺癌干性的基础（图2O）。
图2.FAO节拍杂乱看护SD教学的肺癌干性
3.ACSL1合成的PA-CoA有助于SD促进肺癌干性
进一步作家通过比较野生型C57BL/6J小鼠肺组织中日夜节拍杂乱的FAO基因和KRAS小鼠肺肿瘤中上调的FAO基因来细则SD教学FAO节拍杂乱促进肺癌干性的漏洞分子，发现了13个可能与SD引起的致癌FAO节拍杂乱相关的基因（图3A）。其中，ACSL1 抒发水平在SD措置的KRAS小鼠肺肿瘤和PDX模子中显耀升高（图3B和C）。此外，与对照比较，SD措置的LLC1同源移植肿瘤中ACSL1 mRNA的节拍性抒发杂乱（图3D）。为了说明ACSL1在SD促进的肺肿瘤发生和肿瘤干性中的作用，作家开采了KRASACSL1小鼠，并通过气管内打针汉恒生物提供的AAV-GFP-Cre病毒教学肺癌和ACSL1敲除（图3E）。不错看到ACSL1敲除逆转SD促进的肺癌进展（图3F）。雷同的，PDX模子中ACSL1的敲除（KO-A1）也可阻断SD的促肿瘤作用（图3G、H），并考据了PDX模子中，SD需要ACSL1来促进肿瘤干性（图3I）。为了细则ACSL1在SD下促进肺癌干性所行使的代谢物，作家分析了可能看成ACSL1底物和产物的长链（12-20碳）FAO代谢物。数据标明，SD条目下ACSL1敲除的KRAS小鼠肿瘤中各式FFAs向FA-carnitines的革新被阻断（图3J）。由于棕榈酸（PA，FFA 16:0）是最主要的满盈脂肪酸（占东谈主体脂肪酸的20%-30%），ACSL1可将PA革新为PA-CoA，并进一步以PA-carnitine的口头转运到线粒体中促进FAO历程，作家鸠集施行数据标明，PA-CoA呈文了ACSL1敲低所导致的肿瘤干性（图3K和L）和肿瘤孕育（图3M和N）的扼制。以上猖狂标明，SD破裂ACSL1节拍，过度激活其将PA革新为PA-CoA的才调，进而刺激FAO促进肺肿瘤孕育和干性（图3O）。
图3. ACSL1合成的PA-CoA有助于SD促进肺癌干性
4.ACSL1感知SD教学的CLOCK节拍杂乱，促进肺肿瘤发生
接下来，作家通过进一步施行来细则SD破裂ACSL1节拍以促进肺肿瘤发生的机制。通过千里默可能调控ACSL1抒发的中枢时钟基因（CCGs），作家筛选出CLOCK和BMAL1与ACSL1 mRNA的抒发呈正关系（图4A）。此外，在LLC1同源移植肿瘤中，SD打乱了CLOCK mRNA和卵白的日夜节拍，且处于高抒发水平，但对BMAL1 mRNA的抒发莫得显耀影响（图4B和C）。雷同，在KRAS肿瘤中，SD也上调CLOCK卵白水平（图4D）。为了商榷CLOCK和BMAL1是否通过转录调整ACSL1的抒发，作家分析了cstrome data Browse的数据，说明了在U2OS和LoVo细胞中，CLOCK和BMAL1与ACSL1的初始子区域齐有鸠集（图4E），且ChIP-qPCR（OLFML3组为阳性对照）和荧光素酶汇报施行果决出ACSL1初始子上的E-box2元件是CLOCK-BMAL1介导ACSL1反式激活的鸠集位点（图4F和G）。接着，作家构建KRASCLOCK小鼠，并通过气管内打针汉恒生物提供的AAV-GFP-Cre病毒教学肺癌和CLOCK敲除。CLOCK敲除扼制SD引起的肿瘤（图4H和I），且在PDX模子和LLC1同源移植肿瘤中，敲除CLOCK逆转SD的促肿瘤孕育和肿瘤干性作用（图4J和K）。总之，以上猖狂标明SD教学的CLOCK节拍杂乱通过转录调控ACSL1的抒发来促进肺肿瘤发生历程中的肿瘤干性（图4L）。
图4. ACSL1感知SD教学的CLOCK节拍杂乱，促进肺肿瘤发生
5.ACSL1教学ZDHHC5介导的CLOCK Cys194棕榈酰化，扼制泛素化降解巩固CLOCK卵白
作家进一步探究了SD教学的日夜节拍杂乱下看护高水平CLOCK的机制，发现敲低ACSL1缩小了CLOCK的卵白水平，但不影响其mRNA水平。由于ACSL1催化的PA-CoA可看成卵白棕榈酰化的底物，作家探索了棕榈酰化在ACSL1-CLOCK相互作用中的脚色。行使棕榈酰化扼制剂2-BP或棕榈酰化增强剂PB措置说明了CLOCK中存在棕榈酰化（图5A和B）。敲低ACSL1扼制CLOCK的棕榈酰化和卵白水平，但PA-CoA措置不错逆转ACSL1敲低的作用（图5C）。为了细则调整CLOCK棕榈酰化和卵白水平的棕榈酰蜕变酶，作家通过siRNA筛选出ZDHHC5介导了CLOCK的棕榈酰化（图5D），而ACSL1敲低可阻断ZDHHC5以及SD措置教学的CLOCK棕榈酰化（图5E和F），且SD可打乱CLOCK棕榈酰化的节拍（图5G）。鸠集在线网站臆测泄漏CLOCK中第7和194位半胱氨酸残基是其潜在的棕榈酰化位点，并在各物种中保守（图5H）。通过抒发半胱氨酸突变体筛选出Cys194是CLOCK主要的棕榈酰化位点（图5I），且C194S突变阻断了ACSL1敲低教学的CLOCK棕榈酰化扼制（图5J）。为了进一步商榷CLOCK棕榈酰化是否通过扼制其卵白降解来看护其巩固性，作家行使卵白质合成扼制剂CHX和卵白酶体扼制剂MG132考据了ACSL1介导的CLOCK Cys194棕榈酰化通过扼制泛素-卵白酶体降解路线来巩固CLOCK（图5K-M）。要而论之，ACSL1以依赖于ZDHHC5的样子介导CLOCK Cys194位点棕榈酰化，CLOCK的棕榈酰化通过扼制泛素-卵白酶体降解路线来看护CLOCK巩固性（图5N）。
图5. ACSL1教学ZDHHC5介导的CLOCK Cys194棕榈酰化可通过扼制泛素化降解来巩固CLOCK卵白
6.归附β-内啡肽节拍可归附SD打乱的CLOCK/ACSL1节拍，放松肺癌干性
由于寝息失调会扯后腿内分泌，激素的节拍很是在SD关系癌症中起遑急作用。作家从14种寝息关系激素中，发现β-内啡肽（Endor）可显耀下调CLOCK和ACSL1 mRNA的抒发（图6A）。为了商榷Endor的本事调理法，作家对SD措置的LLC1同源移植肿瘤小鼠进行逐日（ZT8/ZT20，ZT：Zeitgeber time，授时因子）或渗入压泵握续给药（图6B），发现ZT8-Endor可理解逆转SD促进的肿瘤孕育（图6C）。通过ELISA施行对血清Endor水平评估及检测CLOCK和ACSL1的抒发发现，ZT8-Endor可得手将SD组Endor及CLOCK和ACSL1的抒发节拍归附到与对照组一致的模式（图6D-F），且不错扼制肿瘤干性秀气物的抒发（图6G-I）。此外，为了细则ACSL1在Endor本事调理法中的作用，作家行使ACSL1敲低的LLC1肿瘤小鼠进行考据发现Endor本事调理作用由ACSL1介导（图6J-N）。以上猖狂标明Endor的本事调理法可重置被SD打乱的Endor、CLOCK和ACSL1的节拍，具有细致的抗肿瘤效果（图6O）。
图6. 归附β-内啡肽节拍可归附SD打乱的CLOCK/ACSL1节拍，从而放松肺癌干性
7.寝息质地和β内啡肽水平与肺癌患者的CLOCK/ACSL1抒发和不良预后呈负关系
为了评估商榷猖狂的革新后劲，作家进行了前瞻性和追思性商榷（图7A）。前瞻性商榷纪录肺癌患者的血清Endor水良善寝息质地与肺癌发展之间的临床关系性。对66位患者的寝息质地评估泄漏血清Endor水平与表露次数负关系，与深度寝息和快速眼动寝息REM的比例正关系（图7B-D）。其次，接收匹兹堡寝息质地指数（PSQI）问卷对60位患者进行寝息质地评估，数据泄漏血清Endor浓度与寝息评分呈负关系（评分越高，寝息质地越差）（图7E）。因此，SD与低血清Endor水良善较晚期癌症阶段关系。以上临床数据解释了Endor与寝息质地正关系，并标明血清Endor水平是癌症发展的潜在臆测因子。为了评估肺癌患者血清Endor、生化参数和预后要素之间的关系性，作家对62例既往肺癌患者进行了追思性商榷。解释了血清Endor水平与免疫组化分析评估的CLOCK、ACSL1、CD166和Ki-67评分呈负关系（图7F-7I），且ACSL1抒发与CLOCK、CD166和Ki-67的抒发呈正关系（图7J）。KM总活命期（OS）分析泄漏，高Endor血净水平具有正向预后价值（图7K），CLOCK、ACSL1、CD166或Ki-67的高抒发具有负向预后价值（图7L-N）。此外，手术蚁集的肺癌组织中CLOCK和ACSL1的卵白水平高于掌握普通组织（图7O）。综上标明SD、Endor、CLOCK和ACSL1可能是肺癌的孤苦预后要素。
图7.寝息质地和β内啡肽水平与肺癌患者的CLOCK/ACSL1抒发和不良预后呈负关系
总结
要而论之，著述商榷猖狂标明FAO感知日夜节拍杂乱与SD和肿瘤发生相协作。关于SD的癌症患者，使用β-内啡肽进行本事疗法是一种潜在政策。该商榷领导了可对肿瘤发展历程中握续的日夜节拍杂乱进行了解并骚动，同期也为癌症调理带来了新的挑战和机遇。
肺癌肿瘤节拍小鼠干性发布于：上海市声明：该文不雅点仅代表作家本东谈主，搜狐号系信息发布平台，搜狐仅提供信息存储空间行状。